Beyotime碧云天RIPA裂解液(強)(P0013B)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等。

RIPA裂解液可以用于動物、植物的細(xì)胞或組織樣品，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。

使用說明：

1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據(jù)實驗需要加入適當(dāng)?shù)纳鲜龅鞍酌噶姿崦敢种苿┗旌衔铩?/p>

2. 對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會被裂解。植物細(xì)胞宜在冰上裂解2-10min。

對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，輕輕vortex或者彈擊管底以把細(xì)胞盡量分散開。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。輕彈管底以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

對于細(xì)菌或酵母：對于1ml菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用PBS洗滌一次，充分去除液體后，輕輕vortex或者彈擊管底以把細(xì)菌或酵母盡量彈散。加入100-200微升裂解液，輕輕vortex或者彈擊管底以混勻，冰上裂解2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果，細(xì)菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液進行裂解。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞或者1ml的菌液或酵母液中的細(xì)菌和酵母量加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100萬動物細(xì)胞用100微升本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2-4mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。

3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

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