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各種轉(zhuǎn)染試劑的中文說明

各種轉(zhuǎn)染試劑中文說明一、PEIPrimePowder,TransfectionGradeLinearPolyethylenimine(Serochem)轉(zhuǎn)染步驟（以HEK293貼壁細(xì)胞為例）1.細(xì)胞接種：細(xì)胞密度2-6x106cells/mL.2.質(zhì)粒的準(zhǔn)備：在5％最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中，每106個(gè)細(xì)胞稀釋1.0ugpDNA。3.PEI的準(zhǔn)備：在5％最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中，每106個(gè)細(xì)胞稀釋3.0ugPEIPrime，混勻通過快速，短暫渦旋或顛倒數(shù)次試管，...

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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及對策

1冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之...

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RNA提取試劑盒是如何進(jìn)行提取的呢？

RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA，用LB10裂解樣品后，加入氯仿，溶液分為無色水相和粉紅色有機(jī)相，RNA在水相中；用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA），流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比，該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專一性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣。RNA提取試劑盒的提取步驟：1、將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘...

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CST抗體制備的原理和方法

CST抗體的制備工藝：根據(jù)CST抗體制備的原理和方法，主要分為單克隆抗體、多克隆抗體和基因工程抗體三大類。早期傳統(tǒng)的抗體制備方法是將抗原經(jīng)各種途徑免疫動(dòng)物，由于抗原物質(zhì)具有多種抗原決定簇，故可刺激產(chǎn)生多種抗各種決定簇的抗體,形成細(xì)胞克隆，合成和分泌抗體到血清或體液中，故在其血清中實(shí)際上是含多種抗體的混合物，這種用體內(nèi)免疫法所獲得的免疫血清為多克隆抗體(polclonalantibody,Pab)，也是第一代抗體。由于這種抗體是不均一的，無論是對抗體分子結(jié)構(gòu)與功能的研究或是臨床...

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的幾種方法

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染的幾種方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過...

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