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蛋白表達的常見問題

蛋白表達實驗的時，有時候實驗會覺得參考實驗方法和克隆的蛋白基因序列完q沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結果。那么你知道蛋白表達的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1、載體構建錯誤，很多克隆新人常常弄錯讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其復制位點常有一兩個堿基的差異；另外有些酶產生粘端有些酶產生平端，這些都容易導致讀碼框錯誤，從而無法表達出來。2、宿主菌選擇不當。不同的宿主菌其基因型是不同的。有些經過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇適...

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PCR反應體系包括什么

PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細胞內DNA的半保留復制過程，以擬擴增的模板DNA分子，與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應體系，經過重復地變性一退火一延伸三步，擴增新的目的DNA鏈，這個過程通過控制反應體系的溫度來實現(xiàn)。那么你知道PCR反應體系包括什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板(template)模板即擴增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質粒DNA等)或RNA(如總RNA、...

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為什么qPCR提RNA不提DNA

定量PCR（qPCR）是一種在PCR反應中實時監(jiān)測核酸擴增產物的方法。為什么qPCR提RNA不提DNA？RNA更能反映gene的表達水平依據(jù)中心法則，細胞內的DNA序列首先被轉錄成RNA分子，特別是信使RNA（mRNA），隨后mRNA攜帶遺傳信息，用于指導蛋白質的合成。mRNA的豐度和多樣性是衡量基因表達水平的關鍵指標，它們直接關聯(lián)到特定基因在特定時間和條件下的活性。與蛋白質相比，RNA的水平變化能夠更快地反映基因表達的動態(tài)變化，因為RNA的穩(wěn)定性相對較低，其水平變化可以迅速...

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RNA和WB蛋白的關系是怎樣的？

qRT-PCR（定量逆轉錄聚合酶鏈反應）和Westernblot（蛋白質印跡法）是兩種常用的生物分子檢測技術，它們分別用于檢測mRNA和蛋白質的表達水平。雖然蛋白質是由mRNA翻譯而來，但mRNA的表達水平總是與蛋白質的表達水平一致嗎？做實驗任何一個結果如果你驗證了幾遍都是一樣，那么請不要懷疑自己，也許不是你做錯了，試圖去解釋這種現(xiàn)象!蛋白表達和RNA水平不一致的原因有：轉錄后調控：mRNA在轉錄后可以經歷多種調控過程，如剪接、編輯、降解和穩(wěn)定性調控。這些過程可以影響mRNA...

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加藥處理的細胞如何換液？

加藥處理的細胞換液，需要遵循一定的操作步驟，確保實驗環(huán)境的無菌以及細胞的健康生長。以下是換液的一般步驟：1換液時間：一般建議每24或者48小時換液一次。2準備新的培養(yǎng)基：根據(jù)細胞類型和生長需求，選擇合適的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基新鮮、無菌，并在使用前預熱至37℃。收集舊培養(yǎng)基：輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使舊培養(yǎng)基充分混合。使用移液器將舊培養(yǎng)基收集到廢液缸。注意不要觸碰到細胞表面。3添加新培養(yǎng)基：將收集到的舊培養(yǎng)基丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入新的培養(yǎng)基。確保新的培養(yǎng)基充分覆蓋細胞表面，避免氣泡產生，也...

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