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你知道細胞轉(zhuǎn)染實驗中轉(zhuǎn)染效率低的原因嗎？

轉(zhuǎn)染細胞效率低下的原因在生物醫(yī)學研究中，將外源基因?qū)爰毎匝芯科涔δ芑蚴辜毎宫F(xiàn)出新的特性是非常常見的實驗手段。然而，轉(zhuǎn)染細胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉(zhuǎn)染細胞效率低下的原因，以期為提高轉(zhuǎn)染效率提供有益的思路。1.細胞類型和狀態(tài)不同的細胞類型具有不同的轉(zhuǎn)染效率。一些難轉(zhuǎn)染的細胞，如神經(jīng)元和肝細胞，通常需要更復雜的轉(zhuǎn)染技術(shù)。此外，細胞的生長狀態(tài)也會影響轉(zhuǎn)染效率，處于對數(shù)生長期的細胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應該在70-80%；如...

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RNA的種類與功能介紹

RNA的分類1.信使RNA(mRNA)信使RNA是RNA的一種，主要功能是將DNA上的遺傳信息傳遞到蛋白質(zhì)合成機器——核糖體上，從而實現(xiàn)蛋白質(zhì)的。信使RNA的結(jié)構(gòu)簡單，一般由一條單鏈RNA組成。mRNA的長度差異較大，哺乳動物的mRNA長度一般在5×102～1×105個核苷酸，這種長度的差異使得mRNA能夠攜帶更多的遺傳信息。在細胞中，mRNA的含量占到了總RNA的1%～5%，雖然mRNA的含量相對較少，但種類繁多，因為人體中約有2萬多個基因，每個基因都會產(chǎn)生一種mRNA。正...

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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與方法

脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導入細胞。下面讓我們一起來看看脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與方法吧！脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟進行實驗之前，請先規(guī)劃好實驗，一般細胞轉(zhuǎn)染需要24h-72h，所以要充分了解細胞生長速度，計算所需脂質(zhì)體和DNA...

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實驗中的抗體應用問題和解決方案

抗體是一種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個特征，該外來目標被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標記還是間接標記?如果是直接標記的話，那這個抗體一般不是FITC標記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標記的抗體來直接標記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用...

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一步法RT-qPCR實驗優(yōu)化小技巧

常見的RT-qPCR流程一般分為RNA提取，逆轉(zhuǎn)錄、熒光定量PCR三個步驟，當有的課題需要對某物種進行多種處理后，檢測某個基因的表達水平，以驗證該基因應對不同脅迫壓力的耐受力；或者經(jīng)某種病原菌侵染后，檢測寄主不同基因的表達水平，以探究可能涉及的通路及互作機理等……對于這幾類樣本數(shù)量較大，但樣本只需要檢測一次的實驗方案，我們常常推薦一步法RT-qPCR，即逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR配制一管體系，只需一次上機即可完成表達量的檢測。由于將RNA逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR的體系配制合為一步，...

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